DNA甲基化检测
DNA甲基化是一项能够调控基因表达的重要机制。甲基化的状态在恶性肿瘤的发展中并非一成不变。肿瘤细胞内的全基因组低甲基化程度与疾病进展、肿瘤大小和恶性程度密切相关。因此,DNA甲基化检测是指通过使用多种方法对恶性肿瘤细胞内甲基化程度进行测定,以便更好地判断病变的程度和扩散情况。由此可知,DNA甲基化检测对于肿瘤恶性程度的判断非常重要。
技术原理
NA甲基化是一种重要的基因表达调控机制,而DNA甲基化检测则是利用多种方法对肿瘤细胞DNA甲基化水平进行测定。在恶性肿瘤的发展过程中,甲基化程度并不是静态的,而肿瘤细胞内低甲基化程度与病情恶化、肿瘤体积以及恶性程度密切相关。因此,DNA甲基化检测对肿瘤恶性程度的评估非常重要。 Methylation-specific PCR(MSP)是一种特异性甲基化PCR方法,由Herman等人于1996年提出。该方法利用亚硫酸盐处理基因组DNA,使未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不受影响;然后设计对甲基化和非甲基化序列特异性的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物,倘若针对甲基化DNA链的引物能够扩增片段,则说明该位点存在甲基化;反之,则说明被检测的位点不存在甲基化。MSP方法具有广泛的适用范围,能够检测特异位点是否发生甲基化。 Bisulfite sequencing PCR(BSP)是一种亚硫酸氢盐修饰后的测序方法,由Frommer等人于1992年提出。该方法可靠性高,精确度较高,能够明确目标片段中每一个CpG位点的甲基化状态。使用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,使未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不受影响。然后设计BSP引物进行PCR,在扩增过程中,所有尿嘧啶都会转化为胸腺嘧啶。最后,对PCR产物进行测序,便可确定CpG位点是否发生甲基化。另外,利用克隆技术可以提高测序成功率,这种方法被称为BSP-克隆测序法。BSP方法具有高度精确性,能够准确检测出甲基化的百分比程度。
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