qPCR及WB实验培训
实时定量聚合酶链式反应(Quantitative Real-time PCR, qPCR)是一种实时检测PCR过程中荧光信号变化的技术,可以定量检测目标分子的含量。
qPCR技术主要用于DNA或cDNA的定量分析,如基因表达分析、病毒载量检测等。
技术原理
qPCR通过在反应体系中加入荧光探针或荧光染料,在PCR过程中实时监测荧光信号的变化,并通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析,从而计算出目标分子的拷贝数。
实验流程
- 样本制备与保存
- RNA提取
- 核酸质量检测
- 逆转录
- qPCR预实验
- qPCR实验
- 数据分析
Western Blot实验培训
免疫印迹(Immunoblotting)又称为蛋白质印迹(Western Blot,WB),是一种综合性的免疫学检测技术,用于检测细胞或组织提取物中的蛋白表达水平。
该技术广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。
技术原理
WB是利用已知的特异性抗体与抗原(即组织细胞中的目的蛋白)能特异性结合的原理,通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂(如酶、金属离子、同位素)显示一定的颜色或发光来对组织细胞内目的蛋白定性及半定量的研究。
实验流程
- 样本制备
- 凝胶上样、电泳
- 转膜
- 封闭
- 抗体孵育
- 显影
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